تشخيص فعاليت آنزيم L- آلانيل آمينوپپتيداز در ميكروارگانيسمها به وسيلة سوبستراهاي توليد كنندة فلوئورسنس (فلوروژنيك) پيش مرگ

تشخيص فعاليت آنزيم L- آلانيل آمينوپپتيداز در ميكروارگانيسمها به وسيلة سوبستراهاي توليد كنندة فلوئورسنس (فلوروژنيك) پيش مرگ

چكيده

مجموعه اي از سوبستراهاي آنزيمي فلوئوروژنيك كه يك نوع self-immolative spacer (جداكننده هاي داوطلب) را تشكيل مي دهند، به هدف تشخيص فعاليت L- آلانيل آمينوپپتيداز در ميكروارگانيسم هاي موجود در محيط كشت آگار سنتز شدند. اين سوبستراها باعث توليد كلني هاي ميكروارگانيسم حاوي فلوئورسنت با ميكروارگانيسمهاي گرم منفي شدند.

1. مقدمه

ملكولهايي كه حاوي self-immolative spacer هستند، در زمينه هايي مانند دارورساني، سيستم هاي پيش دارو، سنسورهاي شيميايي و سنسورهاي آنزيمي كاربردهاي وسيعي پيدا كرده اند¹. در يكي از جنبه هاي طراحي self-immolative spacer ها سوبستراهاي فلوئورسنت داراي ساختار عمومي 1 (تركيب شمارة 1 نشان داده شده در فرآيند 1) به دور يك هستة پارا-آمينو بنزيل الكل (PABA) ساخته شدند تا تشخيص فعاليت آنزيم پروتئاز چنانكه در شكل 1 نشان داده شده است، فعال سازي شود. اين سيستم به اين منظور طراحي شده است كه حضور يك آنزيم پروتئاز منجر به رهاسازي يك مشتق فنولي فلوئورسنت مانند تركيب شمارة 4 گردد. بنابراين، سوبستراهاي فلوئورسنت شدة ضعيف از نوع شمارة 1، به وسيلة يك آنزيم مناسب بطور هيدروليتيك شكسته شده و واسطة شماره 2 به نام 4-آمينوبنزيل الكل آريله شده در [1]O را توليد مي كنند كه متعاقبا دچار شكستگي و رها شدن تركيب ايمين شمارة 3، و مشتق فنولي فلوئورسنت شمارة 4 بهمراه آن مي شود. رنارد، روميو و همكارانشان آماده سازي دو سوبستراي فلوئورسنت بر اساس ساختار عمومي شماره 1 ، يك سنسور با ساختار شمارة 5 براي تشخيص آنزيم پنيسيلين Gآسيلاز^2،3 و يك پروب با ساختار شمارة 6 براي تشخيص فعاليت Caspase-3 را توصيف كرده اند (تصوير1)². سوبستراهاي با لومينسانس شيميايي داراي ساختار مشابه براي تشخيص فعاليتهاي پنيسيلين Gآسيلاز و Caspase-3 نيز تشريح شده اند⁴. يك آزمون فلوروژنيك (توليد كنندة فلوئورسنس) بر پاية ساختار شمارة 7 براي نظارت بر فعاليت آنزيم آغازكنندة اتوفاژي (خود خواري) ATG4B اخيرا گزارش شده است (تصوير 1)⁵. شناسايي انواع خاص فعاليت آنزيمي در ميكروارگانيسمها، در ميكروبيولوژي تشخيصي نقش بسيار مفيد خود را اثبات كرده است⁶. در اين مقاله بطور خاص مي توان تشخيص فعاليت L- آلانيل آمينوپپتيداز را نام برد كه تمايز قايل شدن ميان ميكروارگانيسمهاي گرم مثبت و منفي را ميسر كرده است^7،8. اين آنزيم در ميكروارگانيسمهاي گرم منفي توزيع گسترده اي دارد، درحاليكه، در مقابل، در اغلب ميكروارگانيسمهاي گرم مثبت، غايب است و يا فراواني كمتري دارد. سوبستراهاي فلوروژنيكي كه براي شناسايي فعاليت آنزيم L- آلانيل آمينوپپتيداز استفاده شدند، شامل مادة تجاري مشتق كومارين، تركيب 8 است كه تركيب شمارة 9، مادة شديدا فلوئورسنت شدة 7-آمينو-4- متيل كومارين را در حضور يك آنزيم L- آلانيل آمينوپپتيداز آزاد مي كند (فرآيند 2). سنتز و ارزيابي مجموعه اي از سوبستراهاي فلوروژنيك 10 (X= S,O) كه مادة فلوئورسنت 2-(2-آمينوفنيل) بنزوتيازول (X= S)‌ شمارة 11 و 2-(2- آمينوفنيل) بنزوكسازول (X= O)‌ شمارة 11 را در حضور L- آلانيل آمينوپپتيداز توليد كردند، قبلا شرح داده شده است⁹. سوبستراهاي فلوروژنيك L- آلانيل آمينوپپتيداز مشتق شده از 2-(4-آمينوفنيل) بنزوتيازول نيز فراهم و ارزيابي شدند¹⁰.

تعداد صفحات ترجمه شده :29

تعداد صفحات انگلیسی:9

[1] (O-arylated-4-aminobenzyl alcohol، اضافه شدن حلقة آروماتيك: arylation)

• مشخصات محصول
• دسته‌بندی محصول
• برچسب‌ها
• دیدگاه‌ها